Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展快速的过程中逐渐扩展

从第一次注意到人微内自身抗微到注意到1改型白血病诊疗副作用的成果领军在儿童时期就有很好的揭示，多个人微内自身抗微感染性的儿童中所有70%在胰岛素反转后10年内罹患白血病，而随访15年的儿童这一比重减小到84%。远比，占诊疗1改型白血病一半以上的改型1改型白血病的复发机制还不会给予充分的研究课题。

愈来愈多的人开始用作再行的系统来界定1改型白血病的成果：幼微在注意到多种人微内自身抗微时进入第1之前，注意到血压异常时进入第2之前，注意到副作用时进入第3之前。一些多发人微内自身抗微感染性的幼微，在1期和2期，成果较很慢，并发展为复发的1改型白血病。我们之前揭示了一分组在首次监测到多种人微内自身抗微试样后将近10年无白血病的极很慢成果者，这分组病症伤亡人数少，但构造相当清楚。随后，我们发现人微内自身免疫特异性CD8+T细胞膜质叔父化在成果减很慢的病症中所基本不依赖于，但在近期复发和长时间依赖于的白血病病症中所很较易监测到。这可能表明，与成果病症来得，这些病症自身免疫质叔父化的调控加强。

早期研究课题表明，尽管调控性T细胞膜(Treg)数量短时间，但白血病病症依赖于一些的系统缺点，其中所包括对IL-2的质叔父化并能减小。此外，白血病病症中所的现象CD4+T细胞膜可能对调控格外具抵抗性，乏善可陈为现象T细胞膜的抑止减弱，自然导致的Treg和微外导致的游离Treg，以及免疫经历的CD4+T细胞膜中所IL-2质叔父化减弱。本研究课题的目的是揭示了CD4+调控性T细胞膜(Treg)在一小群极减很慢成果者中所的构造，他们的同期为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以人群系统化的纵向研究课题，在21岁以下确诊的病症家庭成员中所检查1改型白血病的危险因素所。我们之前揭示了长时间减很慢成果者的构造，他们保持多重人微内自身抗微感染性超过10年，但不会注意到白血病的诊疗副作用，很慢性或非来进行性自身免疫。随后，10名在此期间保持无白血病并愿意共享大量微内试样的减很慢成果者纳入T和B细胞膜的系统比对。在迄今为止的研究课题中所，8名很慢成果者(SP分组)，中所位成年43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的人微内自身抗微感染性。所有的行动者都保持稳定1改型白血病成果的1期，尽管一些人随后一落千丈了人微内自身抗微对某些免疫的感染性质叔父化，然而，一名病症已经保持稳定2期将近6年，但不会注意到诊疗副作用，一名病症被诊断为白血病，该测试者72岁，在采集实验试样时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据比对中所对该供微来进行了实质上分析报告。剥离外周血单个核细胞膜(PBMCs)，采用多参数流式细胞膜术和T细胞膜抑止试验分析报告供微中所Treg的高频领军、性状和的系统。用作FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、密切相关和重归)来进行无行政官员聚类比对，分析报告Treg性状。

结果：与保健供微来得，来自很慢成果微的清醒CD4+T细胞膜的行政官员聚类推测，需要的话的清醒CD4+ Treg高频领军减小，与糖皮质激素游离的TNFR相关肽(GITR)解读减小有关。一名HbA1c下降时的病症与成果减很慢者和反转的对照分组来得，Treg谱有所有所不同。的系统得出结论，与保健供微来得，来自减很慢成果微的Treg特异性的CD4+现象T细胞膜抑止明显受损。乏善可陈为对现象CD4+T细胞膜CD25和CD134解读的抑止减小。

平面图1 侧重的性状比对推测，CD4+Treg亚改型在很慢成果配置文件中所减小。由FlowSOM转化的Treg室，聚集在来自所有供微的活命CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标有物解读解剖出10个元簇:清醒T细胞膜_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞膜;HLA-DR + GITR +清醒T细胞膜;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)用作9个有所不同Treg标有转化的10个元簇的MST。每个数据流值得一提的是一个战略性(100个战略性)，格外大的元战略性(10个元战略性)在数据流分组周围上色。每个数据流中所的饼平面图透露单个标有的解读级别。(b)每个元聚类的热平面图，以推测整微标有解读。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)转化平面图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说总质量为每个metacluster盒支线平面图(总质量> 0.05%)确定为HD和SP分组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞膜(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞膜(l)。黄色左上角值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 用作CITRUS的预测模改型证实，Treg高频领军的减小是成果减很慢的标志。分级特异性(a - f)和柑橘比对(g-k)比较SP行动者和反转的HD行动者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)子代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l小团微的值得一提的是性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读来进行剥离，实时FlowSOM小团微。(b) HD(黑点)和SP(星点)分组以及供微SP 606(黄色)中所CD25+ cd127的高频领军摘要平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+特异性叔父集的盒支线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)龙眼簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读低压着色，斜线出彩的簇被识别为SP和HD配置文件之间的有所不同。(j)盒支线平面图推测了在SP(星点)和HD(灰点)分组中所，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的一般来说总质量(比重)。(k)直方平面图推测每个簇的性状(暗红色)和Treg标有一般来说解读与背景解读(黄色);上列，存储器Treg_3;示例一行，存储器Treg_4。背景与所有其他簇中所标有的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查

平面图3 与保健献血者来得，成果减很慢者清醒treg的GITR减小。每个清醒CD4+T细胞膜元簇(清醒T细胞膜_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞膜;HLA-DR + GITR +清醒T细胞膜;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个解读标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的解读热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中所所有HD(蓝灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR解读串联，推测直方平面图(c)和摘要平面图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检查，p< 0.07(黄色)所有供微包括，p< 0.05(黄色)供微SP 606和反转的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR解读，从分级特异性，从所有HD(蓝灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)串联，推测直方平面图(e)和摘要平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检查

平面图4 来自减很慢成果的CD4+ treg细胞膜管控现象CD4+T细胞膜的并能减小。SP分组用黄色的支线和左上角透露，HD分组用黑色的支线和左上角透露，黄色的支线/左上角透露供微sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜来进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标有为CFSE, Treg按判读的比重高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠活命化细胞膜，培植3天后来进行流式细胞膜术监测。(a-d)与CD4+需要的话者一般来说应的treg培植(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培植。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE抑止倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止倍数。用作感染性对照(需要的话的响应细胞膜则有treg)计算抑止倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 现象CD4+T细胞膜对减很慢成果的T细胞膜活命化的抑止格外敏感。SP分组用黄色的支线和左上角透露，HD分组用黑色的支线和左上角透露，黄色的支线/左上角透露供微sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜来进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标有，treg按判读的比重高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠活命化细胞膜，培植3天后来进行流式细胞膜术(CD25反染)和细胞膜因叔父比对。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同培植。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE抑止百分领军(b)。(c,d) CD25抑止百分领军(c)和CD134抑止百分领军(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中所的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论证：我们得出的论证是，来自减很慢成果叔父的活命化清醒CD4+Treg在GITR解读中所给予了扩展和丰富，凸显了有利于研究课题Treg在1改型白血病风险幼微中所的异质性的必要性。

原文记事：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28